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冷凍細(xì)胞操作步驟：

1．收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞；
2．以25μl臺(tái)盼藍(lán)溶液稀釋25μl細(xì)胞懸液；用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)并計(jì)算細(xì)胞存活率（至少應(yīng)該在90%以上）；
3．細(xì)胞懸液在4℃ 條件下200磄離心10分鐘；
4．將沉淀的細(xì)胞重新懸浮在冷凍液中（大約5?06細(xì)胞/0.5 ml 冷凍液）；
5．將細(xì)胞懸液加入到冷凍管中，每管0.5 ml；
6．將冷凍管置于-80℃冰箱中；
7．24小時(shí)后，將冷凍管移入液氮罐中；
8．在記錄本或電腦中記錄下每一個(gè)冷凍管的位置以確保在以后應(yīng)用時(shí)能夠找到每一個(gè)冷凍管。

培養(yǎng)條件：
*培養(yǎng)基：DMEM高糖培養(yǎng)基90%；胎牛血清10%。
培養(yǎng)條件：37.0C carbon dioxide（CO2）,5%